分光光度計是用不連續(xù)的波長采樣反射物體或透射物體的一種測量儀器。由于不同物體分子的結(jié)構(gòu)不同，對不同波長光線的吸收能力也不同，因此，每種物體都具有特定的吸收光譜。能從含有各種波長的混合光中，將每一種單色光分離出來，并測量其強(qiáng)度的儀器叫做分光光度計。
分光光度法是比色法的發(fā)展。比色法只限于在可見光區(qū)，分光光度法則可以擴(kuò)展到紫外光區(qū)和紅外光區(qū)。分光光度法則要求近于真正單色光，其光譜帶寬大不超過3-5nm，在紫外區(qū)可到1nm以下，來自棱鏡或光柵，具有較高的精度。
分光光度計可分為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。
項(xiàng)目對分析結(jié)果的影響
1、波長準(zhǔn)確度
分光光度法原理要求照射在樣品池上的單色光必須對應(yīng)于樣品吸收光譜中的某一個吸收峰的波長。由于儀器的制造和調(diào)整誤差，單色光的實(shí)際波長與儀器的波長讀數(shù)值間都存在一定的誤差。樣品中絕大部分的主要吸收峰都有一定的寬度，對波長準(zhǔn)確度要求允許寬些。但是，當(dāng)吸收峰寬度較小，而且吸收峰兩側(cè)邊緣比較陡直，此時波長準(zhǔn)確度的影響就必須引起注意。
2、透射比(吸光度)準(zhǔn)確度
很顯然,透射比或吸光度的誤差越大,測試結(jié)果的可信性越差,從而影響到測試數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
3、雜散光
雜散光是由于光學(xué)元件制造誤差以及光學(xué)和機(jī)械零件表面的漫反射形成的。雜散光是分析樣品的非吸收光，隨著樣品濃度的增加，雜散光的影響也隨之增大，將給分析結(jié)果帶來一定的誤差。在紫外的短波區(qū)域光源強(qiáng)度和檢測器的靈敏度均明顯減弱，雜散光的影響更不能忽視。因此，雜散光的大小也是儀器性能的一項(xiàng)重要指標(biāo)。
使用與維護(hù)
1、若大幅度改變測試波長，需稍等片刻，等燈熱平衡后，重新校正“0”和“100%”點(diǎn)。然后再測量。
2、指針式儀器在未接通電源時，電表的指針必須位于零刻度上。若不是這種情況，需進(jìn)行機(jī)械調(diào)零。
3、比色皿使用完畢后，請立即用蒸餾水沖洗干凈，并用干凈柔軟的紗布將水跡擦去，以防止表面光潔度被破壞，影響比色皿的透光率。
4、操作人員不應(yīng)輕易動燈泡及反光鏡燈，以免影響光效率。
5、WFZ800-DA、756型等分光光度計，由于其光電接收裝置為光電倍增管，它本身的特點(diǎn)是放大倍數(shù)大，因而可以用于檢測微弱光電信號，而不能用來檢測強(qiáng)光。否則容易產(chǎn)生信號漂移，靈敏度下降。針對其上述特點(diǎn)，在維修、使用此類儀器時應(yīng)注意不讓光電倍增管長時間暴露于光下，因此在預(yù)熱時，應(yīng)打開比色皿蓋或使用擋光桿，避免長時間照射使其性能漂移而導(dǎo)致工作不穩(wěn)。
6、放大器靈敏度換擋后，必須重新調(diào)零。
7、比色杯的配套性問題。比色杯必須配套使用，否則將使測試結(jié)果失去意義。在進(jìn)行每次測試前均應(yīng)進(jìn)行比較。
具體方法如下：分別向被測的兩只杯子里注入同樣的溶液，把儀器置于某一波長處，石英比色杯；220nm、700nm裝蒸餾水，玻璃比色杯：700nm處裝蒸餾水，將某一個池的透射比值調(diào)至100%，測量其他各池的透射比值，記錄其示值之差及通光方向，如透射比之差在±0.5%的范圍內(nèi)則可以配套使用，若超出此范圍應(yīng)考慮其對測試結(jié)果的影響。
典型故障及其排除方法
1、儀器不能調(diào)零。可能原因：
a.光門不能*關(guān)閉。解決方法：修復(fù)光門部件，使其*關(guān)閉。
b.透過率“100%”旋到底了。解決方法：重新調(diào)整“100%”旋鈕。
c.儀器嚴(yán)重受潮。解決方法：可打開光電管暗盒，用電吹風(fēng)吹上一會兒使其干燥，并更換干燥劑。
d.電路故障。解決方法：檢修電路。
2、儀器不能調(diào)“100%”，可能原因：
a.光能量不夠。解決方法：增加靈敏度倍率檔位，或更換光源燈(盡管燈還亮)。
b.比色皿架未落位。解決方法：調(diào)整比色皿架使其落位。
c.光電轉(zhuǎn)換部分老化。解決方法：更換部件。
d.電路故障。解決方法：調(diào)修電路。
3、測量過程中,“100%”點(diǎn)經(jīng)常變動。可能原因：
a.比色皿在比色皿架中放置的位置不一致，或其表面有液滴。解決方法：用擦鏡紙擦干凈比色皿表面，然后將其安放在比色槽的左邊，上面用定位夾定位。
b.電路故障(電壓、光電接收、放大電路)。解決方法：送修。
4、數(shù)顯不穩(wěn)。可能原因：
a.預(yù)熱時間不夠。解決方法：延長預(yù)熱時間至30分鐘左右(部分儀器由于老化等原因，長時間處于工作狀態(tài)時，也會工作不穩(wěn))。
b.光電管內(nèi)的干燥劑失效，使微電流放大器受潮。解決方法：烘烤電路，并更換或烘烤干燥劑。
c.環(huán)境振動過大、光源附近空氣流速大、外界強(qiáng)光照射等。解決方法：改善工作環(huán)境。
d.光電管、電路等其它原因。
小結(jié)
綜上所述，以下幾個問題應(yīng)引起儀器操作人員注意：
1、比色皿架及比色皿在使用中的正確到位問題：有些使用者對這個問題不夠重視，因操作不當(dāng)造成偶然誤差，嚴(yán)重影響分析結(jié)果。首先，應(yīng)保證比色皿不傾斜放置。稍許傾斜，就會使參比樣品與待測樣品的吸收光徑長度不一致，還可能使入射光不能全部通過樣品池，導(dǎo)致測試比準(zhǔn)確度不符合要求。其次，應(yīng)保證每次測試時，比色皿架推拉到位。若不到位，將影響到測試值的重復(fù)性或準(zhǔn)確度。后,還應(yīng)保證比色皿的清潔度,延長其使用壽命。
2、干燥劑的使用問題。干燥劑失效將導(dǎo)致：a.數(shù)顯不穩(wěn)、無法調(diào)“0”點(diǎn)或“100%”點(diǎn)(電路或光電管受潮)。b.反射鏡發(fā)霉或沾污，影響光效率、雜散光增加。鑒于上述原因，分光光度計的放置地點(diǎn)應(yīng)遠(yuǎn)離水池等濕度大的地方、干燥劑應(yīng)定期更換或烘烤。
3、儀器的工作環(huán)境：應(yīng)避免陽光直射、避免強(qiáng)電場、避免與較大功率的電器設(shè)備共電、避開腐蝕性氣體等。
